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Propidium iodide
目录号 : SJ-MD0036 别名 : PI 中文名称 : 碘化丙啶 热销产品 纯度:98.46%

Propidium iodide (PI) 是一种常用的细胞核红色荧光染料,作为一种溴化乙锭 (EB) 的类似物,能够嵌入碱基之间实现与 DNA 结合。这种结合没有或者几乎无序列倾向性,大约每 4-5 个 DNA 碱基对结合一个染料。Propidium iodide 也能与 RNA 结合,需要用核酸酶处理来区分 DNA 和 RNA 染色。Propidium Iodide 常用于细胞凋亡 (apoptosis) 或细胞坏死 (necrosis) 的检测,常用于流式细胞仪分析。

CAS No. :25535-16-4
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规格 价格 货期
10 mg ¥  340.00
50 mg ¥  700.00
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Cas No.
25535-16-4
分子式
C27H34I2N4
分子量
668.39
储存方式
(自收到货起)
 Pure form  -20℃   3 年

 In solvent

建议分装储备液,避免反复冻融!

 -80℃   2 年
 -20℃   1 年
储存注意事项

密封,防潮,粉末避光保存,粉末溶成母液后也需避光保存。

生物活性

Propidium iodide (PI) 是一种常用的细胞核红色荧光染料,作为一种溴化乙锭 (EB) 的类似物,能够嵌入碱基之间实现与 DNA 结合。这种结合没有或者几乎无序列倾向性,大约每 4-5 个 DNA 碱基对结合一个染料。Propidium iodide 也能与 RNA 结合,需要用核酸酶处理来区分 DNA 和 RNA 染色。Propidium Iodide 常用于细胞凋亡 (apoptosis) 或细胞坏死 (necrosis) 的检测,常用于流式细胞仪分析。

产品类别

染料/荧光试剂

体外研究 (In Vitro)

Propidium iodide 已证明对神经元没有毒性作用,是当今最常见的膜完整性和细胞活力的标记物,在固定前使用 (预固定 Propidium iodide 染色法)。预固定染色已广泛用于定量评估急性神经变性模型中的神经元细胞衰退,可视化为退化神经元的强烈标记的 PI+-固缩核 [1]

Propidium iodide 不能穿过活细胞的膜,因此可以通过流式细胞仪分析测量凋亡细胞的百分比。此时,Propidium iodide 当作一种 DNA 含量决定因子,处于细胞周期 G2 和 M 期的细胞所包含的 DNA 含量是 G0 和 G1 期细胞的两倍,S 期的 DNA 含量介于这两个含量之间。流式细胞仪数据显示与电泳和比色法获得的结果具有极好的相关性。这种新的快速、简单和可重复的方法被证明可用于评估骨髓、胸腺和淋巴结等异质组织中特定细胞群的凋亡 [2]

激发波长 (Ex)
535 nm
发射波长 (Em)
615 nm
使用方法

操作指南 (以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)

1. 储存液的配制

称取 1 mg Propidium iodide 粉末 (M.Wt=68.4) ,用 1 mL 去离子水充分溶解配成 1 mg/mL (1.5 mM) 的储存液。

【注】:储存液 4ºC 避光保存,并尽量避免反复冻融。至少 6 个月稳定。

2. 贴壁细胞复染步骤 (荧光显微镜检测)

2.1 样本准备:根据自身样本选择合适步骤固定细胞。Propidium iodide 染色一般在其它染色完成后再进行。Propidium iodide 复染要求细胞经透化处理。
2.2 RNase 酶处理:若样本使用多聚甲醛,甲醛或者戊二醛固定,则需要进行 RNase 处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定,通常不需要此步操作。

     a:于 2×SSC (0.3 M NaCl,0.03 M sodium citrate,pH 7.0) 溶液平衡样本;

     b:将本品置于含有 100 µg/mL DNase-free RNase 的 2×SSC 溶液中 37°C 孵育 20 分钟;

     c:用 2×SSC 溶液清洗样本 3 次,每次 1 分钟。
2.3  复染:

     a:于 2×SSC (0.3 M NaCl,0.03 M sodium citrate,pH 7.0) 溶液平衡样本;

     b:直接用 2×SSC 稀释 1 mg/mL (1.5 mM) Propidium iodide 储存液 1:3000,得到 500 nM 的 Propidium iodide 工作液。通常添加 300 µL 染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色 1-5 分钟。

     c:2×SSC 清洗几次,流尽多余液体,加入抗淬灭剂封片。

     d:选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。

3. 悬浮细胞复染步骤 (流式细胞仪检测)

3.1 样本准备:根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。或者使用如下的步骤:
    a:收集细胞,密度约 2×105~1×106。离心后吸除上清,轻弹管壁就剩下的液体重悬细胞。加入 1 mL 常温存放的 PBS;
    b:将所有的重悬细胞转移到 4 mL 于 -20ºC 预冷的无水乙醇,在高速涡旋混匀的同时一边用枪缓慢的添加细胞悬液到乙醇内。于 -20ºC 乙醇中固定 5-15 分钟。

    c:离心收集细胞,除去乙醇。轻弹管壁以弹松细胞后,加入 5 mL 室温的 PBS。允许细胞水化 15 分钟;

3.2 复染

    a:用染色液 (100 mM Tris,pH 7.4,150 mM NaCl,1 mM CaCl2,0.5 mM MgCl2,0.1% Nonidet® P-40) 稀释 1 mg/mL (1.5 mM) Propidium iodide 储存液 1:500,得到 3 µM 的 Propidium iodide 工作液。1 mL 的 Propidium iodide 染色液足够用于每个细胞样本的检测。

    【注】:工作液的使用浓度可以根据自身实验体系调整,也可以直接使用 PBS,HBSS 等缓冲液直接稀释 Propidium iodide 储存液到需要的浓度。

    b:样本制备的最后一步后离心收集细胞,去除上清,用手轻弹管壁以弹松细胞后,加入 1 mL 的 Propidium iodide 染色工作液。室温孵育 15  分钟后,流式细胞仪进行细胞分析。若用显微镜观察,则需要离心样本,去除上清并重悬细胞在新鲜的缓冲液中。吸取 1 滴悬液到载玻片上,盖上盖玻片后观察。

4. 染色质 FISH 复染步骤

4.1 样本准备:根据标准步骤制备样本。复染之前的最后一步用去离子水清洗样本以去除玻片上残留的缓冲液。室温晾干。此步骤有助于减少非特异性的背景染色。

4.2 复染
    a:工作液的配制:用 PBS 缓冲液直接稀释 1 mg/mL (1.5 mM) 的 Propidium iodide 储存液 1:1000,得到 1.5 µM 的 Propidium iodide 染色工作液。滴加 300 µL 的工作液直接到样本。有必要的话,工作液内加入新鲜制备的 RNase A (终浓度:10 µg/mL)。可使用塑料盖玻片均匀分布染液在载玻片上。室温避光条件下孵育样本 30 分钟;如果加入 RNase 则 37ºC 孵育。

    b:去除盖玻片,用 PBS 或去离子水清洗以除去没有结合的染料;
    c:用吸水纸围绕样本周围吸取残留液体,盖上玻璃盖玻片用石蜡或指甲油封住盖玻片边缘。也可用抗荧光淬灭剂进行封片。
    d:选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。

参考文献

[1]. Hezel M, et al. Propidium iodide staining: a new application in fluorescence microscopy for analysis of cytoarchitecture in adult and developing rodent brain. Micron. 2012 Oct;43(10):1031-8.

[2]. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodidestaining and flow cytometry. J Immunol Methods. 1991 Jun 3;139(2):271-9.

溶解度数据

体外 (25°C) DMSO (吸湿的 DMSO 对产品的溶解度有显著影响, 请使用新开封的 DMSO)
100 mg/mL (149.61 mM)
H2O (如您选择水作为储备液,请稀释至工作液后,
再用 0.22 μm 的滤膜过滤除菌后使用)
3.57 mg/mL (5.34 mM)

制备储备液

制备储备液 浓度 溶液体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.4961 mL 7.4807 mL 14.9613 mL
5 mM 0.2992 mL 1.4961 mL 2.9923 mL
10 mM 0.1496 mL 0.7481 mL 1.4961 mL
50 mM 0.0299 mL 0.1496 mL 0.2992 mL

备注:请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效溶液超过 3 个月建议复检,以免影响活性。

纯度: 98.46%

1:一般建议:为了使其更好的溶解,请用 37℃ 加热试管并在超声波、水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异,仅做参考。
2:运输条件:蓝冰运输或根据您的需求运输。
3:  SparkJade 小分子产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。

4:部分产品 SparkJade 仅能提供部分信息,思科捷不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。

5: 为更好的适应实验需求和市场情况,SparkJade 部分产品陆续更新中,最新产品信息以官网为准,不便之处,敬请谅解!
6:实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
7: SparkJade 的所有产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。
The molarity calculator equation
Mass (g) = Concentration (mol/L) × Volume (L) × Molecular Weight (g/mol)
The dilution calculator equation
Concentration (start) × Volume (start) = Concentration (final) × Volume (final)
This equation is commonly abbreviated as: C1V1 = C2V2
Molecular weight calculator
Enter the chemical formula of the compound to calculate its molar mass and elemental composition
g/mol
Animal experiment calculation converter
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系SparkJade为您提供正确的澄清溶液配方)
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计算结果:

工作液浓度 mg/ml;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

1. 首先保证母液是澄清的;
           2. 一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。