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Alcian Blue 8GX
目录号 : SJ-MD0118

Alcian Blue 8GX 是一种常用的酞菁染料,可与糖蛋白和葡糖胺聚糖结合。Alcian Blue 8GX 在生物染色中有广泛的应用,包括脑肿瘤中的蛋白质和细胞和组织中的 DNA。

CAS No. :33864-99-2
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SparkJade小分子产品文献引用

Cas No.
33864-99-2
分子式
C56H68Cl4CuN16S4
分子量
1298.86
储存方式
(自收到货起)
 Pure form  -20℃   3 年

 In solvent

建议分装储备液,避免反复冻融!

 -80℃   6 个月
 -20℃   1 个月
储存注意事项
密封,防潮,粉末避光保存,粉末溶成母液后也需避光保存。

生物活性

Alcian Blue 8GX 是一种常用的酞菁染料,可与糖蛋白和葡糖胺聚糖结合。Alcian Blue 8GX 在生物染色中有广泛的应用,包括脑肿瘤中的蛋白质和细胞和组织中的 DNA。

体外研究 (In Vitro)

Alcian Blue 8GX 工作液配置 [1]
配制 1 mg/mL 的 Alcian Blue 8GX: 将 0.6 mL 冰醋酸加入 dd H2O 中,使终体积为 20 mL。再加入 20 mg Alcian Blue 8GX,充分溶解。
Alcian Blue 8GX 染色细胞微团培养 [1]
(1) 配制预处理液 A: 将 0.5 mL 氢氧化铵溶液加入 500 mL 70% 乙醇中。
(2) 配制预处理液 B: 向 70% 乙醇中加入 25 mL 冰醋酸,使终体积为 500 mL。
(3) 从微团培养中弃去培养基,使用1 mL 的 Bouin's 固定液在室温下固定 15 分钟。
(4) 用预处理液 A 和 B 清洗。
(5) 用 2 mL 的 1 mg/mL Alcian Blue 8GX 在室温下染色 1 小时。
(6) 用双蒸水洗掉染料,重复四次。并浸泡在 2 mL 双蒸水中。
(7) 拍摄照片。
(8) 用双蒸水再次洗掉染料。
(9) 通过将培养物与 1 mL 的 6 M 盐酸胍在室温下孵育过夜来提取染料。
(10) 使用分光光度计在 OD 595 处测量光密度。
细胞培养注意事项 [1]
(1) 避免细胞死亡: 为了防止细胞死亡,胚胎/细胞在接种前应始终保持在冰上。
(2) 细胞活力低于 70-80% 时的处理: 如果细胞活力低于 70-80%,可以考虑使用死细胞去除试剂盒 (如 Miltenyi 死细胞去除试剂盒,Miltenyi Biotech,货号: 130-090-101) 来去除死细胞。
(3) 细胞接种于 35 mm 培养皿: 当细胞接种于 35 mm 培养皿时,应保持高密度细胞区域。培养 1.5 小时后,细胞应已贴壁。小心加入含有纤连蛋白的高级 DMEM 培养基。
(4) 分离细胞的使用与传代: 分离出的细胞可以在分离当天用于微团培养。然而,这些细胞最多可以传代三次,从分离开始的总培养时间不应超过 10 天。
Alcian Blue 8GX 染色糖胺聚糖 [2]
(1) 肥大细胞用甲醇-40%甲醛-乙酸 (85:10:5 体积比)固定 30 min,冲洗后对细胞进行染色。
(2) 用 0.5% (w/v) Alcian Blue 8GX 溶解在 3% (v/v) 醋酸中,pH 2.4,染色 0.5 或 2 小时。
(3) 与 (1) 相同的饱和了尿素的溶液,用 HCl 将 pH 恢复至 2.4,染色时间为 0.5 小时。
(4) 与 (1) 相同的溶液染色 0.5 小时后,再用溶解在 0.125 N HCl 中的 0.3% (w/v) 苏木精 O (pH 0.9) 染色 5 分钟。
(5) 染色之后分别用蒸馏水冲洗,风干,并用 Entellan 封片。
(6) 为了检测组胺的存在,将大鼠腹膜肥大细胞的未固定或固定的涂片风干后,用 1% (w/v) 邻苯二甲醛 (OPT) 溶解在二甲苯中进行染色 (染色时间 2 分钟)。染色过程在相对湿度100%的室温密闭室内进行。染色完成后,玻片被沥干并立即用四氢糠醇封片。
(7) 使用配备Leitz Ploemopak 2 (用于入射荧光) 和 75 W 高压氙灯的 Leitz Orthoplan 显微镜检查肥大细胞颗粒中组胺-OPT 复合物的黄色荧光强度。使用的滤光系统包括一个 TK 510/K 515 二向色镜、一个 K 510 阻挡滤光片和一个 2 x KP 490 (= KP 500) 激发滤光片。
Alcian Blue 8GX 染色胎儿软骨 [3]
(1) 大鼠胎取自交配雌性 Spraque-Dawley 大鼠。在妊娠第 21 天 (精子/塞第 5 天,妊娠第 0 天),采用二氧化碳窒息法安乐死。采用标准剖宫产方法获得胎儿,随后通过口服戊巴比妥钠实施安乐死。新西兰白兔和荷兰带兔在交配时是 5-6 个月大,孕兔于妊娠第 28 天处死,静脉注射戊巴比妥钠获得胎儿。每个胎儿均口服戊巴比妥钠处死。
(2) 胎儿取出内脏,剥皮并固定在 70% 乙醇中 3-7 天。
(3) 先将 8 份 95% 乙醇和 2 份冰乙酸配制成混合液,再加入 Alcian Blue 8GX 配制为浓度为 75 和 100 mg/L 的溶液。

(4) 大鼠胎儿在 Alcian Blue 8GX (100 mg/L ) 中染色 24 h,兔子胎儿在 Alcian Blue 8GX (75 mg/L) 中染色 24 h,然后在 95% 乙醇中冲洗 6 h。
(5) 将大鼠和兔子胎儿分别浸泡在 1% 和 1.25% 氢氧化钾中,大鼠胎儿用 12 mg/L Alizarin Red S 染色 48 h,兔子胎儿用 6 mg/L Alizarin Red S 染色 24 h。
(6) 转移到 70% 乙醇和甘油 (1:1) 的溶液中进行清理,硬化和检查。
Alcian Blue 8GX 用于蛋白质测定 [4]
(1) 将目标蛋白用水或 0.1 M NaCl 溶液溶解,工作浓度为 25 μg/ml。
(2) 使用 Britton-Robinson buffer (pH 7.24, 含0.04 M H3PO4,0.04 M HAc 和 0.04 M H3BO3) 控制酸度,用 0.5 M NaCl 溶液调节水溶液的离子强度。
(3) 在 10 mL 容瓶中加入适当的蛋白质工作液,1.0 mL 的 Britton-Robinson buffer 和适当的 Alcian Blue 8GX 溶液。除 IgG 用 0.1 M NaCl 外,其余均用双蒸水将混合物稀释至 10 mL。
(4) 将混合物用于吸收或者 RLS 测量。通过调节 RF-540 荧光光谱仪的激发和发射单色器 (∆λ = 0 nm) 对 RLS 光谱进行扫描。RLS 强度在 398.0 nm 处测定,可以测定包括牛血清白蛋白 (BSA)、人血清白蛋白 (HAS)、胃蛋白酶 (Pep) 和纤维素酶 (Cel) 在 内的蛋白质,检测限为 30 ng/mL 以下。
(5) Alcian Blue 8GX 与 BSA 相互作用的 RLS 光谱。浓度为 1.0 × 10-5 M。

参考文献

[1]. Hiroki Ueharu, et al. Isolation and Culture of Cranial Neural Crest Cells from the First Branchial Arch of Mice. Bio Protoc. 2022 Apr 5;12(7):e4371. 

[2]. J Tas, et al. The Alcian blue and combined Alcian blue--Safranin O staining of glycosaminoglycans studied in a model system and in mast cells. Histochem J. 1977 Mar;9(2):205-30. 

[3]. Brian G Redfern, et al. An alternative Alcian Blue dye variant for the evaluation of fetal cartilage. Birth Defects Res B Dev Reprod Toxicol. 2007 Jun;80(3):171-6.  

[4]. Yuan Fang Li, et al. Determination of Proteins Based on Their Resonance Light Scattering Enhancement Effect on Alcian Blue 8GX. Original Papers. 2000 Dec; VOL.16

溶解度数据

体外 (25°C) DMSO (吸湿的 DMSO 对产品的溶解度有显著影响, 请使用新开封的 DMSO)
31 mg/mL (23.87 mM) 60℃水浴;超声

制备储备液

制备储备液 浓度 溶液体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.7699 mL 3.8495 mL 7.6991 mL
5 mM 0.1540 mL 0.7699 mL 1.5398 mL
10 mM 0.0770 mL 0.3850 mL 0.7699 mL
50 mM 0.0154 mL 0.0770 mL 0.1540 mL

备注:请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效溶液超过 3 个月建议复检,以免影响活性。

1:一般建议:为了使其更好的溶解,请用 37℃ 加热试管并在超声波、水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异,仅做参考。
2:运输条件:蓝冰运输或根据您的需求运输。
3:  SparkJade 小分子产品为非无菌包装,若用于细胞培养,请提前做预处理,除去热原细菌,否则会导致染菌。

4:部分产品 SparkJade 仅能提供部分信息,思科捷不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。

5: 为更好的适应实验需求和市场情况,SparkJade 部分产品陆续更新中,最新产品信息以官网为准,不便之处,敬请谅解!
6:实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。
7: SparkJade 的所有产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。
The molarity calculator equation
Mass (g) = Concentration (mol/L) × Volume (L) × Molecular Weight (g/mol)
The dilution calculator equation
Concentration (start) × Volume (start) = Concentration (final) × Volume (final)
This equation is commonly abbreviated as: C1V1 = C2V2
Molecular weight calculator
Enter the chemical formula of the compound to calculate its molar mass and elemental composition
g/mol
Animal experiment calculation converter
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系SparkJade为您提供正确的澄清溶液配方)
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计算结果:

工作液浓度 mg/ml;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

1. 首先保证母液是澄清的;
           2. 一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。