操作指南 (以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
LAP 的制备:
1. LAP 合成 [1]
(1) 对二甲基苯基膦酸酯与 2,4,6-三甲基苯甲酰氯进行了迈克利斯-阿尔布佐夫反应。在室温下,在氩气中向持续搅拌的等摩尔二甲基苯基膦酸酯 (3.0 g) 中缓慢加入 3.2 g (0.018 mmol) 的 2,4,6-三甲基苯甲酰氯。
(2) 反应混合物搅拌 18 小时后,向上一步的反应混合物中加入四倍于量的溴化锂 (6.1 g) 和 100 mL 的 2-丁酮,然后加热至 50℃。经过 10 分钟,出现固体沉淀。混合物冷却至常温,静置四小时,然后过滤。滤液用 2-丁酮洗涤并过滤三次,以去除未反应的溴化锂。LAP 粉末在真空烘箱中干燥,并储存在棕色瓶中避光。
2. 储存溶液的制备 [2]
在六点天平上称取 LAP 适量,加入相应质量的 10% GelMA,以形成 1% w/w 的 LAP 浓度。将 LAP 溶液 (0.1% w/w) 进行系列稀释,得到 1、0.2、0.04 和 0.008 mg/mL 的超纯水溶液。混合液在 40℃ 下超声处理 30 分钟。含 1% LAP 的 10% GelMA 经过 0.2 μm PES 膜进行无菌过滤。
3. LAP 对 3D 生物打印过程中细胞活力,GelMA 水凝胶的膨胀比、降解率和孔径大小的影响: [3]
(1) 膨胀用生物墨水包含 5% (w/v) 纯 GelMA 和 0.5% (w/v) LAP,负载细胞的生物墨水通过动态光学投影立体光刻交联形成一层。UV 强度为 10 mW/cm2,曝光时间为 45 秒。层厚约为 500 μm。细胞浓度为 1×106/mL。选择的 LAP 浓度为 0.3% 和 0.9% (w/v),分别代表低和高的光引发剂浓度。选择的打印时间为 0 和 15 分钟。打印样本在 0、12 和 24 小时内孵育。细胞活力通过荧光检测法进行评估。
(2) 生物墨水在强度为 10 mW/cm2 的紫外光下交联 45 秒以制备样本。样本制备后立即的干重为 W0,而特定孵育时间后的干重为 Wt。降解百分比计算为 (W0-Wt)/W0。使用扫描电子显微镜捕捉了用 LAP 固化的 GelMA 样本的微观结构。