在室温下溶解 DMSO 储液,然后在您的实验体系中,按照 1:100 的比率 (体积比体积) 将抑制剂 Cocktail 加入到样品溶液中 (比如细胞 裂解液或者组织抽提物)。按照建议的用量,一管产品可以抑制 20g 湿重的细胞得到的提取物中的蛋白酶。
【注 1】: DMSO 在低温下融化较慢,建议在 25°C 下融化。
【注 2】: 细胞处理前,先要将 Cocktail 加入到裂解液中并混匀,收集完细胞后立即加入准备好的裂解液。
【注 3】: 某些 DUB 蛋白酶 (例如 ATAXIN-3) 无法被常见的蛋白酶抑制剂抑制,例如 E-64、AEBSF、bestatin、leupeptin 和 Aprotinin。(Reference: Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012)