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In solvent
建议分装储备液,避免反复冻融!
Laurdan 是一种膜透性荧光探针,它对与之结合的细胞膜磷脂相具有光谱敏感性。Laurdan 的广义极化 (GP) 定量可用于磷脂相的鉴定。
Laurdan 是一种膜透性荧光探针,用于对细胞膜中的脂筏 (又称脂质微域) 进行成像 [1][2]。
Laurdan 具有膜嵌入性,它的疏水尾部可以插入细胞膜的磷脂双层中,而极性头部留在膜表面附近,能够探测膜内部的极性变化和水分子存在情况 [3]。
Laurdan 具有相态敏感性,在液晶相中的荧光发射会显示较大的红移,而在凝胶相中则会显示较小的红移,能够检测膜的相态和流动性 [4]。
Laurdan 可测量细胞膜的广义极化 (GP),高 GP 通常与膜的低流动性、低极性或高胆固醇含量相关,而低 GP 则相反 [5]。
操作指南 (以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
Laurdan (1:1000 至 5:1000) 可作为生物传感器监测 NIH3T3 细胞迁移过程中膜含水量的变化 [6]。 Laurdan 染色液配置 1.1 制备储存液 将 Laurdan 溶解在二甲基亚砜 (DMSO) 中,制备 1.8 mM 储备溶液。 1.2 工作液的配制 将 Laurdan 原液以 1:1000 的稀释度稀释。 Laurdan 染色 1) 将 NIH3T3 细胞培养在杜氏改良 Eagle 培养基中,培养基中补充 10% 胎牛血清、5 mL Pen-Strep 和 2.5 mL 1 M HEPES。 2) 将新鲜分离的 NIH3T3 细胞接种到涂有纤连蛋白的 35 mm Mattek 玻璃底培养皿中。 3) 将细胞在 37°C 下与 Laurdan 一起孵育 40 分钟。 4) 利用 LSM710 META 激光扫描显微镜观察。 5) SimFCS 软件处理,通过测量荧光素 (pH 11) 来校准系统和 FLIM 数据的相量图。
[1]. Horváth Á, et al. Effect of Lipid Raft Disruptors on Cell Membrane Fluidity Studied by Fluorescence Spectroscopy. Int J Mol Sci. 2022 Nov 8;23(22):13729.
[2]. Alvares SM, et al. The role of membrane microdomains in transmembrane signaling through the epithelial glycoprotein Gp140/CDCP1. Biochim Biophys Acta. 2008 Mar;1780(3):486-96.
[3]. Jay AG, et al. Disorder Amidst Membrane Order: Standardizing Laurdan Generalized Polarization and Membrane Fluidity Terms. J Fluoresc. 2017 Jan;27(1):243-249.
[4]. Bianchetti G, et al. Investigation of the Membrane Fluidity Regulation of Fatty Acid Intracellular Distribution by Fluorescence Lifetime Imaging of Novel Polarity Sensitive Fluorescent Derivatives. Int J Mol Sci. 2021 Mar 18;22(6):3106.
[5]. Yu W, et al. Fluorescence generalized polarization of cell membranes: a two-photon scanning microscopy approach. Biophys J. 1996 Feb;70(2):626-36.
[6]. Golfetto O, et al. Laurdan fluorescence lifetime discriminates cholesterol content from changes in fluidity in living cell membranes. Biophys J. 2013 Mar 19;104(6):1238-47.
备注:请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。溶液超过 3 个月建议复检,以免影响活性。
纯度: 98.80%
4:部分产品 SparkJade 仅能提供部分信息,思科捷不保证所提供信息的权威性,以上数据仅供参考交流研究之用。
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,注:如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请先联系SparkJade);
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL Corn oil,混匀澄清。
注意:1. 首先保证母液是澄清的; 2. 一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
技术支持Support@sparkjade.com