操作指南(以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
1. Oil Red O 染色准备
1.1 Oil Red O 原液:将 0.5g Oil Red O 溶于 200 ml 异丙醇中,56℃ 反应 1 小时。 进一步使用前请先冷却。 室温保存。
1.2 Oil Red O 工作液:使用当天新鲜配制。 将四份蒸馏水与六份储备溶液混合。 让溶液静置至少 15 分钟。 将形成沉淀。 通过滤纸过滤溶液,例如 3 MM Chr Whatman 滤纸。 使用前保持室温。
1.3 1×PBS,pH 7.4。
1.4 60% (v/v) 异丙醇的蒸馏水溶液。
2. 固定细胞
2.1 用 PBS 仔细清洗细胞,因为它们很容易从板上脱落。
2.2 每孔加入 1 ml 4% PFA,在水平表面室温孵育 20 分钟,不要摇动或倾斜。
2.3 将 PFA 丢弃在危险废物室中,并在 PBS 中洗涤细胞两次,每次 5 分钟。
3. 盖玻片的安装
3.1 在载玻片中间滴加 40 ml 封固液。
3.2 用镊子从六孔板上取下盖玻片,并用纸巾吸干边缘。 然后将盖玻片放在封固液上 (细胞面朝下),注意不要留有气泡。
3.3 室温避光孵育 2 小时,使封固液凝固。
3.4 用湿纸巾擦去盖玻片上的沉淀物。
3.5 将载玻片置于 4℃ 避光保存。
4. Oil Red O 染色
4.1 固定细胞并去除 PBS (参见第 2 节)。
4.2 用 60% 异丙醇洗涤细胞。
4.3 每孔加入 1.5 ml Oil Red O 工作液,孵育 15-30 分钟。 在显微镜下观察,直至细胞正确染色。 当/如果沉淀开始形成时,请务必停止染色。 用 60% 异丙醇清洗细胞。
4.4 用 1 ml PBS 洗涤细胞并保留在 PBS 中直至进一步使用。
4.5 将盖玻片安装在载玻片上或使用染色细胞通过 Oil Red O 提取进行定量。 Oil Red O 染色的细胞可以直接拍照,或者可以使用任何配备 RGB 相机的显微镜获得盖玻片上细胞的更高放大倍数图像。