操作指南(以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
本品以蓝色粉末形式提供,低内毒素水平,达细胞培养级。通常情况,哺乳动物细胞的筛选浓度范围是 50~400 μg/mL,细菌的筛选浓度为 25 μg/mL。
溶液配制方法:将 Phleomycin D1 粉末溶于HEPES buffer (5 g/L, pH=7.2 ± 0.1),浓度为 100 mg/mL, 然后用 0.22 μm 滤膜过滤。
Phleomycin D1 通常以 100 μg/mL 的浓度使用,比原液稀释 1000 倍。然而,最佳浓度需要对你的细胞进行测定。下面列出了在一些哺乳动物细胞中选择 Phleomycin D1 的建议浓度。
Cell line |
Medium |
Zeocin Concentration |
B16 (Mouse melanocytes) |
RPMI |
20-250 μg/mL |
CHO (Chinese hamster ovarian cells) |
DMEM |
100-500 μg/mL |
COS (Monkey kidney cells) |
DMEM |
100-400 μg/mL |
HEK293 (Human embryonic kidney cells) |
DMEM |
100-400 μg/mL |
HeLa (Human uterine cells) |
DMEM |
50-100 μg/mL |
J558L (Mouse melanocytes) |
RPMI |
400 μg/mL |
MCF-7 (Human breast adenocarcinoma cells) |
DMEM |
100-400 μg/mL |
MEFs (Mouse embryonic fibroblasts) |
DMEM |
200-400 μg/mL |
THP-1 (Human monocytes) |
RMPI |
200 μg/mL |