操作指南(以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)
1. 台盼蓝工作液的配制 (仅供参考)
1.1 制备储存液
用 0.85% Nacl 配制 0.4% 的台盼蓝:如用 100 mL 0.85% Nacl 溶解 400 mg 台盼蓝。
注:台盼蓝储存液建议分装后于 4℃ 避光保存。
1.2 工作液的配制
用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液,配制成 0.04% 的台盼蓝工作液。
注:请根据实际情况调整台盼蓝工作液浓度,且现用现配。
2. 细胞染色(仅供参考)
2.1 悬浮细胞:离心收集细胞,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。
贴壁细胞:弃去培养基,加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。
2.2 加入 1 mL 台盼蓝工作液,室温孵育 5 分钟。
2.3 400 g,4℃ 离 3-4 分钟,弃去上清。
2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。
2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。