使用 Dextran sulfate sodium salt (MW 36000-50000) 诱导结肠炎(以下是 SparkJade 的推荐方案。本方案仅提供指导原则,请根据您的具体实验进行修改)。
【致病原理】
在小鼠或大鼠的饮用水中加入葡聚糖硫酸钠 (DSS) 可引起结肠上皮损伤和持续数天的强烈炎症反应,诱发结肠炎。结肠炎的临床表现通常包括水样腹泻、便血和体重减轻。诱导的病症表现与人溃疡性结肠炎 (UC) 极度相似,可用于研究急、慢性结肠炎的发生发展机制。并多种属动物中均可造模:小鼠、大鼠、斑马鱼、猪、果蝇等。
【具体造模方法】
Animal |
Administration |
Mice: Male C57BL/6J mice • 9-week-old |
1% w/v • po (added in drinking water) • administered in 7 days cycles |
Mice: SPF-grade C57BL/6 mice • 6-8 weeks old |
2.8% w/v • po (added in drinking water) • administered in 7 days cycles |
Rat: Sprague-Dawley male rats • 7-9 weeks old • 170-200 g |
Administration: 4.5%-6.0% w/v • po (added in drinking water) • administered in 7 days cycles |
【注意事项】
1. 小鼠按周期给药,每个周期处理 7 天,周期间间隔 10 天 (期间提供正常饮水)。急性结肠炎诱导执行 1 个周期即可,慢性结肠炎可重复处理 3 个周期。
2. 小鼠模型的急性期模型的使用剂量通常为 3-5% (W/V),慢性模型的使用剂量通常为 1-3% (W/V),大鼠的急性剂量为 4.5-6.0% w/v;具体实验需求及动物类型的适用浓度宜继续摸索。
3. 应用无菌水配置 DSS 饮用水,然后用 0.22 μM 的滤膜过滤;或者用高压灭菌的无菌水配制。
4. 无论急性 DSS 结肠炎模型还是慢性 DSS 结肠炎模型,肠炎严重程度与成功与否均与小鼠种属 (不同基因背景)、DSS 浓度、给药周期等相关。
【造模成功指标】
1:疾病活跃指数评分 (Disease Activity Index, DAI score):从三个方面进行评估打分,分别为体重、粪便粘稠度、粪便潜血等指标,DAI 评分为三个指标之和。
DAI 评分细则
评分
|
体重下降百分比
|
粪便粘稠度
|
粪便潜血
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0
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0
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正常
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阴性
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1
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1-5%
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软便
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浅蓝
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2
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5-10%
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黏液样便
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蓝色
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3
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10-20%
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稀液状便
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深蓝
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4
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>20%
|
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肉眼血便
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2:组织学变化评分:组织学变化评分为上述各指标之和,在急性结肠炎模型中淋巴结形成不做评分。组织学分析的标准方法为 HE 染色。
组织学变化评分
评分
|
溃疡(个)
|
上皮细胞变化
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炎症浸润
|
淋巴结(个)
|
0
|
0
|
正常
|
无
|
无
|
1
|
1
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杯状细胞缺失
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隐窝周围浸润
|
1
|
2
|
2
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杯状细胞大面积缺失
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黏膜肌层出现浸润
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2
|
3
|
3
|
隐窝缺失
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黏膜肌层普遍浸润,黏膜增厚
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3
|
4
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>3
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隐窝大面积缺失或息肉状再生
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黏膜下层浸润
|
>3
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3:结肠变化:结肠长度缩短,结肠组织切片中炎症细胞浸润明显增加,甚至溃疡形成。