一、蛋白质印迹(Western Blot, WB)
又称为免疫印迹(Immunoblot),是利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)将样品中分子量大小不同的蛋白分开,然后通过电转移的方法将凝胶中的蛋白转移到固相膜上,再利用抗原、抗体的特异性结合反应,特殊的抗体标记技术以及相应的检测方法,进而对目的蛋白进行定性、相对定量检测的技术。
二、Western Blot用途
※ 检测目标蛋白有无、大小
※ 检测处理后目标蛋白的表达量变化
※ 检测目标蛋白在不同的细胞或组织中的表达量差异
三、Western Blot实验流程
四、样本制备
五、电泳分离
六、转膜
七、封闭
八、抗体孵育
九、检测
原理和方法:
WB常用的检测方法主要有:化学发光检测、底物显色检测和荧光检测(Odyssey系统),实验室最常用的则是化学发光检测。
1、化学发光原理:
在HRP的催化下,Luminol与H2O2反应生成过氧化物,过氧化物不稳定随即分解,形成一种能发光的电子激发中间体,当中间体由激发态返回至基态,就会产生荧光。
2、三种不同检测方法的优缺点:
推荐产品:我们推荐思科捷化学发光相关产品,帮您更好地完成实验。↓
产品特点:
※ 灵敏度高;信号强;背景低;
※ 可检测ng甚至pg级的低丰度的蛋白;
※ 可以通过用X光片压片或其它适当化学发光成像设备检测样品。
Sparkjade®是山东思科捷生物技术有限公司旗下为科研工作者提供创新型产品及专业技术服务的品牌。Sparkjade®拥有分子生物学、小分子化合物、免疫学、细胞生物学、实验耗材五个系列产品,为科研工作者提供优质产品与专业的技术服务。