✍什么是RNA？

RNA即核糖核酸，是由核糖核苷酸经磷酸二酯键聚合而成的生物大分子，在细胞的生命活动中发挥着重要作用。

✍常用的RNA提取方法有哪些？

主要包括溶液法和吸附柱法。

1. 溶液法

溶液法就是我们常说的Trizol法，其主要成分包括异硫氰酸胍和苯酚，能够迅速裂解细胞和组织，同时使蛋白质和RNase变性，进而保护RNA的完整性。裂解后，加入氯仿进行离心，样品会分为水相层，中间层和有机相层，其中RNA存在于上层水相，而DNA和蛋白质则存在于中间层及下层有机相中。通过这一过程，可以实现RNA的有效分离和纯化。

思科捷溶液法试剂盒

AC0101-SparkZol Reagent

✦常规Trizol试剂

AC0102-SparkZol Reagent LS

✦液体专用Trizol试剂

AC0103-SPARKeasy 超纯总RNA快速提取试剂盒

✦溶液法和吸附柱法的结合

2. 吸附柱法（柱膜法）

柱膜法主要基于硅胶膜或其他特定吸附材料对RNA的选择性吸附原理。首先使用裂解液对细胞或组织进行处理，使细胞裂解，释放出细胞内的RNA。同时，这些试剂还能使RNA酶变性失活，保护释放出的RNA不被降解；其次裂解液中的RNA在特定条件下（如高盐、低pH值）可以特异性地吸附到吸附柱内的硅胶膜或其他吸附材料上；吸附完成后，通过洗涤缓冲液对吸附柱进行洗涤，能够选择性地洗脱吸附柱上残留的蛋白质、多糖、盐离子等杂质。最后使用低盐、高pH值的洗脱缓冲液或无RNA酶的水对吸附柱进行洗脱。

思科捷吸附柱法试剂盒（部分）

AC0202-SPARKeasy 组织/细胞RNA快速提取试剂盒（含基因组DNA清除柱）

✦20min快速提取，无需有毒试剂，无需DNase I消化

AC0205-SPARKeasy 细胞RNA快速提取试剂盒

 ✦7min极速提取，无需有毒试剂，提取的总RNA含microRNA

AC0305-SPARKeasy 新型植物RNA快速提取试剂盒

✦20min快速提取，无需有毒试剂，可提取多种普通植物及多糖多酚植物的RNA

AC0902-SPARKeasy 冻存全血总RNA提取试剂盒

✦可在30 min内完成样品RNA的提取，新鲜血液和冻存血液均可适用

✍RNA提取完成以后，是不是就结束了呢？

不是的，一般提取完RNA以后，我们需要进行RNA的纯度检测和完整性检测。

✍RNA的纯度检测有何作用？

通过检测RNA的纯度可了解不同参数所代表的RNA特征，进而评估其中的杂质含量。

纯度检测（A260/280, A260/230）：其基本原理是核酸最大吸收波长260nm，蛋白质最大吸收波长280nm，碳水化合物及有机溶剂的最大吸收波长230nm。

✍RNA的完整度检测有何作用？

可以进一步判断RNA是发生降解还是存在基因组DNA残留，进而确保RNA的质量以及实验的准确性。

✍如何进行RNA的完整性检测？

采用琼脂糖凝胶电泳，完整的总RNA在凝胶上可看到清晰的28S和18S rRNA条带，且28S条带亮度约为18S条带的2倍，表明RNA完整性好。

通常RNA提取完进行凝胶电泳后会出现四种不同情况的电泳图👇

完整的RNA

具有DNA残留的RNA

具有蛋白残留的RNA

RNA发生降解

通过不同的凝胶电泳结果以及RNA的纯度检测，我们便可以判断提取的RNA是否可用于下游实验了。

本次的星博士小课堂到这里就结束了，星博士祝愿各位科研顺利，我们下节课再见!

下期预告：

对于 DNA 残留、蛋白残留和 RNA 降解这三种情况，星博士将在下期和大家继续分享具体的解决方法。

思科捷RNA提取类高分文献（部分）