“师兄,你上次推荐的发光液一点儿都不好用!”
“怎么可能,我文章里所有WB的条带都是用它显影的,完美的很。”
“吹!我一显影就过曝!!!”
“呀,这不可能呀!这是为什么呢?”
正在做WB实验的你是否也遇到过这种情况呢?明明是有口皆碑的发光液,怎么一遇到你的蛋白,就灾难频出?
真相只有一个,思科捷·福尔摩斯·星博士来告诉你,原因就是你不了解发光液,更不了解如何根据你的蛋白来选择发光液。
发光液通常分为A液和B液,分别含有鲁米诺和过氧化氢成分,在辣根过氧化物酶(HRP)的催化作用下,鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物,过氧化物不稳定随即分解,形成一种能发光的电子激发中间体,当后者由激发态返回至基态,就会产生荧光。发射光在酶-底物反应期间发生,底物耗尽时,信号输出停止。
那么了解了发光液的原理后,我们该如何选择发光液呢?
选择发光液,就像给你的蛋白选择一件“外衣”,需要根据目的蛋白的样貌选择更适合它的那款发光液。
发光液通常根据灵敏度这一关键特性来分类,包括超敏型、特超敏型、极超敏型等,或者根据它们能够检测的蛋白量级(如纳克(ng)、皮克(pg)、飞克(fg))来描述。因此,当你对目标蛋白的表达量有清晰的了解时,选择合适的发光液就变得直接而简单:对于高表达量蛋白,可以选择灵敏度一般的发光液;而对于低表达量蛋白,则应选择高灵敏度的发光液。这样,你就能为你的蛋白实验找到最佳的发光液,确保实验结果的准确性和可靠性。
但是有很多人并不清楚自己的目的蛋白是一个怎样的表达丰度,那该怎么办呢?
其实,绝大多数WB实验检测的蛋白浓度是在pg-ng水平的,用极高灵敏度的发光液反而会出现过曝的现象。因此,针对绝大部分检测蛋白,思科捷新推出了【ED0025】Sparkjade ECL star(特超敏化学发光试剂盒),发光灵敏快速,信号稳定,背景低。
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