RNA,每个生物科研人都不陌生的存在。我们为了研究RNA的功能,通常需要通过反转录将RNA转化为更稳定的互补DNA(cDNA)。得到的cDNA后续可通过分子克隆、PCR、qPCR和测序等技术做进一步的研究。因此,反转录过程是许多RNA实验研究流程的关键步骤。
RNA是反转录的模板,在提取到浓度和纯度合适的RNA后,接下来便是进行RNA反转录。通常RT-PCR等实验前需要先用DNase I消化去除RNA中残留的基因组DNA(gDNA),但是传统DNase I处理过程复杂并容易造成RNA的降解和损失。另外,RNA反转录酶可能具有不同的性质和功能活性,这会影响其反转录长链RNA、高GC含量RNA、具有复杂二级结构的RNA和不纯RNA的能力。所以,现实中有时候会出现RNA反转录实验重复了好几次,但很玄学的就是不按照原计划出结果......
思科捷反转录试剂盒采用高温反转录酶,可以通读GC含量丰富、二级结构复杂的RNA模板,极大提高反转录效率。另外,本试剂盒为一管式反转录预混Mix,2×SPARKscript II RT Plus Master Mix中含有反转录第一链合成所需的所有试剂(SPARKscript II HˉRTase、 RNase Inhibitor、Random Primer、OligodT Primer、dNTP Mixture、Buffer)这些属性改变可增加cDNA长度和产量,提高灵敏性,改善抑制剂耐受性,并缩短反应时间,试剂盒中还使用了具有DNA分解活性的特殊gDNA Eraser,不需要DNase I消化和后续繁琐步骤。
★ 一步反转:基因组DNA清除与反转录15min内一步完成;采用二代逆转录Mix,50-60℃反应打开RNA复杂结构
AG0305 SPARKscript Ⅱ All-in-one RT SuperMix for qPCR(With gDNA Eraser)
01/产品组分
02/反应体系和程序
50℃,15min;85℃,5sec
★ 二步反转:2 min去除基因组DNA,15min完成反转录;采用二代逆转录酶Mix,50-60℃反应打开RNA复杂结构
AG0304 SPARKscript Ⅱ RT Plus Kit ( With gDNA Eraser)
01/产品组分
02/反应体系和程序
去基因组DNA:
42℃,2min
反转录:
若cDNA用于qPCR:50°C,15min
若cDNA用于普通PCR:50°C,30min
思科捷qPCR试剂将热启动HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液和SYBR Green I等试剂预混成一种适合Real Time PCR反应检测用的2×浓度的试剂,具有灵敏度高、特异性强、扩增效率高、稳定性好等特点。使用时只需加入模板、引物和水,便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量,检测结果重复性好,可信度高。
HotMaster Taq DNA聚合酶是一种采用新型抗体修饰的酶,该聚合酶利用抑制剂通过温度调节方式封闭HotMaster Taq DNA聚合酶的底物结合位点,无需额外加热即可进行反应,最大限度的减少了PCR扩增过程中非特异性扩增产物的产生,大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。
★致力打造优美曲线:思科捷SYBR qPCR Mix
性能展示案列: