实验人，实验魂，谁还没有点儿和“西方印迹”（Western Blot）打斗的经历？先附上一张完美战役图展示一下。
提取出满意的蛋白样本后，想要得到满意的WB结果图，必然是得经过重重考验，过五关斩六将，而这第一关就是蛋白SDS-PAGE凝胶电泳，见微知著，电泳时的这些小细节你真的注意到了吗？
蛋白SDS-PAGE凝胶电泳是对蛋白进行定性和半定量分析的一种方法，其工作原理是在施加电场的影响下，不同分子量的蛋白质在筛分基质（凝胶）中的迁移率不同，从而会产生分离。
理想的蛋白电泳结果中蛋白条带清晰锐利，形状平直，大小位置正确，如下图：
可是实验终究不是纸上谈兵，在实际操作中，电泳的真实情况有可能是这样的、这样的、这样的、还有这样的…
蛋白：哎呦哎呦，抓不住啦，抓不住啦，要掉下去了！
呜呼~咱们一起跳大绳
生性不羁爱自由，谁都别拦着我展示！
发令枪一响，我就是这条泳道上最瘦的崽崽！
这下谁还能分得清自己是实验人还是艺术大师呢？
那么，究竟怎样才能得到理想的电泳结果图呢？
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1.清洗玻璃板等配胶装置
用蒸馏水将玻璃板、梳子、制胶板清洗干净，去除附着在上面的残胶、在空气中沾染的飞尘及毛絮。
敲重点：配胶装置中的残胶等其他物质会影响电泳效果，出现凝胶中存在气泡，电泳后蛋白条带不平直的现象。
2. 灌胶
选择想要配制胶厚度对应的玻璃板，将一长一短两块玻璃板对齐后放入制胶夹中卡紧。然后垂直卡在制胶架上。向玻璃板中注入蒸馏水，验漏5min。验漏结束后，倒出蒸馏水，用滤纸吸净玻璃板中残留液体。
敲黑板：配胶验漏一步十分重要，如果配胶装置漏液，会导致制备好的凝胶上下层不均匀，分界线不清晰，影响后续电泳结果。
配制凝胶时，以思科捷10%一步法PAGE彩色凝胶极速配制试剂盒【EC0023】为例，将凝胶试剂盒中下层胶溶液与下层胶缓冲液按体积比1：1混合，再加入促凝剂改良型过硫酸铵溶液混合均匀后，注入玻璃板中间至距短玻璃板上沿1.5cm处；加入下层胶后无需用水压线；按说明书将上层胶溶液与上层胶缓冲液混合，再加入促凝剂后混合均匀，横向平稳注入玻璃板中间。灌胶时尽量使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。
敲重点：配制凝胶时要有三保证：保证玻璃板干净，无液体固体杂质；保证制胶装置密闭性，不漏液；保证上层胶、下层胶各组分混合均匀。
胶凝固与外界温度密切相关，常温凝固需20min左右，气温越低凝固时间越长，如果想要缩短凝固时间，也可适量增加凝胶中促凝剂含量或将胶转移至较高温度环境中。
待到胶凝固后，将含有凝胶的玻璃板从制胶夹上取下，短玻璃板一侧朝内卡进电极里。向内槽中加入电泳液验漏，内槽电泳液需没过短玻璃板。验漏结束后，加入外液。两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。加样。
敲黑板：如果验漏时，内槽出现漏液，继续电泳会使蛋白条带出现整体不规则弯曲现象，可更换或重新安装电泳装置，或将内外槽电泳液均加满。
点样时，样本尽量点在中央的泳道里，点在边上时，有可能出现条带倾斜现象。
上样量不宜太高，样本量过高，可能出现相邻泳道蛋白条带连接的现象。
加样完毕，盖好上盖，连接电泳仪，打开电泳仪开关后，样品在上层胶迁移电压可控制在80-90V，在下层胶迁移电压可控制在110-120V。思科捷一步法彩胶亦可一个电压（80-130V）跑完全程。根据目的蛋白分子量及溴酚蓝指示剂迁移位置判断，停止电泳。
敲重点：如果电泳时电压很高，电流很低，这主要是由于电泳槽没有正确装配，比如内外槽装反，外槽电泳液过少，电流未形成通路。
蛋白电泳
在电泳过程中，出人意料的结果往往是由于一些不引人注意的小细节造成的。除了上文中提到的，制胶梳子与玻璃板是否匹配？胶浓度与检测蛋白大小是否匹配？蛋白样本是否裂解变性完全？电泳液是否达到重复使用上限？电泳电压是否稳定等等细节都会影响蛋白电泳的结果。所以遇到蛋白电泳问题需要从实际操作细节上进行具体分析。
读完此文，相信文章前的你们对自己之前遇到的电泳问题已经有了初步的判断。那么前文提到的几张问题图片的原因及解决办法你们心中是否有数了呢？
